马铃薯X病毒云南分离物单克隆抗体的制备及其检测应用
发布时间:2008-09-18 阅读点击:142
用马铃薯X病毒(Potato virusX,PVX)免疫的BALB/C鼠脾细胞与SP2/0鼠骨髓瘤细胞融合,经筛选克隆,获得2株能稳定传代并分泌抗PVX单克隆抗体(MAb)的杂交瘤细胞2B12和4E7,并分别制备它们的单抗腹水.2株单克隆抗体腹水间接ELISA效价在10-6以上,2B12和4E7的抗体类型及亚类均为IgG1,轻链均为κ链.利用这些单克隆抗体建立了抗原包被的间接ELISA(ACP-ELISA)检测PVX的方法.病叶经1∶600倍稀释、提纯PVX病毒浓度为2 ng/mL(每孔的病毒绝对量为0.2 ng)时,该方法仍能检测到病毒.利用ACP-ELISA方法测定了田间样品,发现PVX在马铃薯上发病很普遍.
马铃薯X病毒(Potato virusX,PVX)是马铃薯X病毒属(Potexvirus)的典型成员,病毒粒子呈弯曲线状,长510 nm,直径13 nm,基因组为单分子线形正义ssRNA,长约6·4kb,外壳蛋白由一种多肽组成,分子量25 kD.PVX主要通过机械摩擦接触传染,其寄主范围较广,可侵染6科240种植物,茄科是主要的寄主.按血清型分类PVX可分为4个株系组群,大部分株系引起马铃薯轻微花叶或隐症,有的株系引起重花叶或皱缩[1,2].PVX是世界性分布的植物病毒,在世界马铃薯各种植地区广泛流行,PVX往往同马铃薯Y病毒复合侵染,引起马铃薯产量的大幅度下降和品种的严重退化[2],…